CKLF1-C19多肽药物开发简介

引言与市场前景：                                      

1. 市场及需求分析：

过敏性疾病是临床常见、治疗困难的疾病，是世界范围威胁公众健康的主要慢性病之一，严重影响着患者的学习、生活和工作。由于空气污染、人工食品增多及精神紧张度增加等因素的影响，近年来，过敏性疾病的发病率急剧上升，已经成为全球性的公共卫生问题。预计在今后的20年内，工业化国家50%的人口将可能患过敏症。世界卫生组织把过敏性疾病列为“21世纪重点研究和预防的疾病”，对过敏性疾病的防治已经成为了刻不容缓的重任。

近年来，哮喘发病率呈全球性上升，据世界卫生组织WHO估计，全球哮喘病的患者多达3亿人，约占全球人口的4.2%（约80%为过敏性）。在我国，哮喘的发病率近年来持续增长，特别是儿童发病率。目前中国哮喘患者约有3000万人，约占全球患者的一成左右，占全国人口的2.3%，哮喘病已成为我国第二大呼吸道疾病，而且大多数患者没有接受正规治疗。

过敏性鼻炎是一个全球性健康问题，它在世界各地均比较常见。据统计，全球大约有10%～25%患有过敏性鼻炎，并且患者数仍在不断增加。美国约有四五千万人有过敏问题，其中3950万人患有季节性过敏性鼻炎。过敏性鼻炎和哮喘是呼吸道疾病，两者的气道炎症具有类似的特点。过敏性鼻炎和哮喘常伴随发生。78％的哮喘患者患有鼻炎，而过敏性鼻炎患者哮喘患病率比非鼻炎者高3倍。

据报道，每年全球过敏性鼻炎治疗药物的销售额达到了60亿美元，具有良好的市场前景。

2. 过敏性鼻炎和过敏性哮喘治疗药物现状和需求：

过敏性鼻炎导致生活质量下降、睡眠质量下降、阻塞性睡眠呼吸暂停，影响工作和学习。过敏性鼻炎还有发展成过敏性哮喘的潜在危险，因此过敏性鼻炎需要安全有效彻底地进行治疗。目前治疗过敏性鼻炎的药物可以鼻内或口服给药，包括抗组胺药、糖皮质激素、抗胆碱能制剂、肥大细胞稳定剂、白三烯受体拮抗剂、过敏原特异性免疫治疗[1]。抗组胺药、抗胆碱能制剂、白三烯受体拮抗剂是拮抗炎症细胞释放的生物活性介质的对症治疗，适用于轻度过敏性鼻炎。糖皮质激素是非特异性抗炎治疗药物，是治疗中-重度过敏性鼻炎最有效的药物，需要长期持续使用，难以停药，但由于激素类药物的副作用，尤其儿童长期使用激素可能会引起生长迟缓的问题[2]，迫切需要新型抗炎治疗药物[3]。

目前临床过敏性鼻炎的治疗方案对于一些重症和耐药病人是不够的，有待开发针对炎症细胞及介质的新的药物。多药联合治疗是成功治疗过敏性鼻炎的关键[4]。

抗IgE重组人源化抗体Omalizumab (Xolair)是一个治疗过敏性鼻炎的新方法。IgE结合肥大细胞、嗜碱性粒细胞的Fc？R1引起细胞释放炎性介质。抗IgE重组人源化抗体可以除掉循环中游离的IgE。Omalizumab选择性结合于IgE的C？3功能域，是IgE与Fc？R1的结合区域，因此阻断了IgE与效应细胞的结合。但Omalizumab的高费用阻碍了它的长期使用，目前Omalizumab还没有被FDA批准用于治疗过敏性鼻炎这一适应症。对于其他药物抵抗病人，特别是季节性发病的病人，周期性用药还是可适用的[5]。

过敏性哮喘治疗药物包括抗组胺药、糖皮质激素、b肾上腺素受体激动剂、抗IgE抗体。Omalizumab已于2003年获FDA批准，用于治疗中度至重度其他过敏性哮喘治疗药不能控制的持续性过敏性哮喘。过敏性哮喘是一个由过敏原刺激体内过量产生IgE所致的长期疾病，Omalizumab可以减少过敏性哮喘的恶化，可在减少和撤除激素治疗时给予有效治疗，但持续的Omalizumab治疗费用昂贵[6]。FDA报道的安全性研究显示Omalizumab长期应用会轻度增加病人心脑血管疾病的发生率，和潜在的增加癌症发生率的可能性[7]。

目前过敏性鼻炎和过敏性哮喘的治疗存在不足，糖皮质激素、b肾上腺素受体激动剂等药物没有针对疾病的根本原因，且长期应用具有副作用。糖皮质激素是非特异性抗炎治疗药物，是治疗中-重度过敏性鼻炎最有效的药物，需要长期持续使用，难以停药。由于激素类药物的副作用，儿童长期使用激素可能会引起生长迟缓的问题，5%的重度哮喘病人对现有治疗方案耐药问题，抗IgE抗体Omalizumab治疗费用昂贵并具有潜在的严重副作用，迫切需要新型抗炎治疗药物。

3. 过敏性鼻炎和过敏性哮喘与趋化因子的关系：

过敏性鼻炎和过敏性哮喘有着共同的气道炎症病理状态，过敏性鼻炎和过敏性哮喘患者接触过敏原后会产生早期相和晚期相反应,涉及的浸润炎症细胞包括Th2细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞[8,9]。其中Th2细胞及其产生的细胞因子是重要的过敏性炎症的始动因素，因此拮抗Th2的药物有可能成为治疗过敏性炎症最有效的药物[10]。趋化因子受体CCR3和CCR4是介导这些过敏炎症细胞浸润的重要趋化因子受体，因此CCR3和CCR4成为治疗过敏性鼻炎和过敏性哮喘的重要靶点[11]。

4. 以趋化因子或受体作为靶点的其他炎症药物的研发现状：

目前，Pfizer的CCR5抑制剂Mavaviroc和Anormed的CXCR4抑制剂Plerixafor 这2种趋化因子受体抑制剂已获批准用于临床。Miraviroc抑制HIV-1感染，Plerixafor用于骨髓干细胞迁出[12]。许多趋化因子受体抑制剂还处在研发阶段，还没有获得批准的趋化因子受体抑制剂用于炎症疾病。其中CCR9抑制剂治疗肠道Crohn's病已进入III期临床，前景良好[13]。目前也没有获得批准的趋化因子受体抑制剂用于过敏性鼻炎和过敏性哮喘的治疗，国外医药公司正在投入大量资金致力于开发CCR3和CCR4抑制剂，用于治疗哮喘等过敏性疾病，这些靶点的药物前景看好[14]。

5. 未来趋化因子及受体靶向药物发展趋势：

GPCR功能上的重要性和可调性及其结构上的易变性，使得GPCR成为最重要的药物作用靶点，超过50%的临床用药物以及正在研发中的药物作用于GPCR及其信号通路。

趋化因子受体为7次跨膜的G蛋白偶联受体（GPCR），是细胞因子家族中唯一通过作用于GPCR发挥功能的成员，趋化因子及受体在炎症病理过程中起着关键作用，以趋化因子及受体为靶点治疗炎症近年来已成为研究热点[15]。

目前靶向趋化因子及受体药物的临床试验预示着趋化因子及受体拮抗剂可以成为有效的抗炎药物，前景看好[16,17]。国外医药公司已投入大量资金致力于开发CCR3和CCR4抑制剂用于治疗哮喘等过敏性疾病，处在临床试验阶段。

通过近些年来以细胞因子、趋化因子及受体为靶点的药物开发出现的不足，趋化因子体系的冗余性，预计针对非单一靶点的靶向药物将会更有效，将是未来开发药物的发展趋势[18,19]。

6. CKLF1-C19多肽作为抗过敏性鼻炎和过敏性哮喘治疗药物的优势：

CKLF1-C19多肽药物开发的适应症为过敏性哮喘、过敏性鼻炎的治疗，具有良好的市场前景。

CKLF1-C19多肽源自人体内源蛋白CKLF1，仅有19个氨基酸[20]，属于小分子多肽药物，其化学合成产物具有生物活性，易于大规模低成本的工业化生产。

CKLF1-C19肽在过敏性鼻炎、过敏性哮喘动物模型中均表现出良好的炎症抑制作用[21,22]。

CKLF1-C19肽机制研究显示，CKLF1-C19肽可拮抗CCR3、CCR4多种趋化因子及受体介导的炎症细胞迁移[22]。符合趋化因子及受体为靶点药物的未来发展趋势，即多靶点拮抗药物。

CKLF1-C19多肽局部滴鼻给药具有良好的药效，与过敏性鼻炎一线治疗激素类药物布地奈德疗效相似。有望成为新的抗炎多肽药物。

参考文献：

[1] Braido F, Sclifò F, Ferrando M, Canonica GW. New therapies for allergic rhinitis. Curr Allergy Asthma Rep. 2014 Apr;14(4):422.

[2] Hoover RM, Erramouspe J, Bell EA, Cleveland KW. Effect of inhaled corticosteroids on long-term growth in pediatric patients with asthma and allergic rhinitis. Ann Pharmacother. 2013 Sep;47(9):1175-81.

[3] Uzzaman A, Story R. Chapter 5: Allergic rhinitis. Allergy Asthma Proc. 2012 May-Jun;33 Suppl 1:S15-8.

[4] Castillo J, Dimov V. Investigational drugs for the treatment of allergic rhinitis. Expert Opin Investig Drugs. 2014 Jun;23(6):823-36.

[5] Vashisht P, Casale T. Omalizumab for treatment of allergicrhinitis. Expert Opin Biol Ther. 2013 Jun;13(6):933-45.

[6] Norman G, Faria R, Paton F, Llewellyn A, Fox D, Palmer S, Clifton I, Paton J, Woolacott N, McKenna C. Omalizumab for the treatment of severe persistent allergic asthma: a systematic review and economic evaluation. Health Technol Assess. 2013 Nov;17(52):1-342.

[7] Early Communication about an Ongoing Safety Review of Omalizumab (marketed as Xolair). FDA Drug Safety Communication issued 07/16/2009, 9/26/2014.

[8] D'Ambrosio D. Targeting chemoattractant receptors in allergic inflammation. Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2005;4(2):163-7.

[9] Pease JE. Targeting chemokine receptors in allergic disease. Biochem J. 2011 Feb 15;434(1):11-24.

[10] Hansbro PM , Scott GV, Essilfie AT, Kim RY, Starkey MR, Nguyen DH, Allen PD, Kaiko GE, Yang M, Horvat JC, Foster PS. Th2 cytokine antagonists: potential treatments for severe asthma. Expert Opin Investig Drugs. 2013 Jan;22(1):49-69.

[11] Pease JE. Asthma, allergy and chemokines. Curr Drug Targets. 2006 Jan;7(1):3-12.

[12] Pease JE, Horuk R. Chemokine receptor antagonists. J Med Chem. 2012;55:9363-92.

[13] Proudfoot AE, Power CA, Schwarz MK. Anti-chemokine small molecule drugs: a promising future? Expert Opin Investig Drugs. 2010 Mar;19(3):345-55.

[14] Pease JE, Horuk R. Recent progress in the development of antagonists to the chemokine receptors CCR3 and CCR4. Expert Opin Drug Discov. 2014 May;9(5):467-83.

[15] Koelink PJ, Overbeek SA, Braber S, de Kruijf P, Folkerts G, Smit MJ, Kraneveld AD. Targeting chemokine receptors in chronic inflammatory diseases: an extensive review. Pharmacol Ther. 2012 Jan;133(1):1-18.

[16] Schall TJ, Proudfoot AE. Overcoming hurdles in developing successful drugs targeting chemokine receptors. Nat Rev Immunol. 2011 May;11(5):355-63.

[17] Yoshie O. Chemokine receptors as therapeutic targets. Nihon Rinsho Meneki Gakkai Kaishi. 2013;36(4):189-96.

[18] Horuk R. Chemokine receptor antagonists: overcoming developmental hurdles. Nat Rev Drug Discov. 2009 Jan;8(1):23-33. doi: 10.1038/nrd2734. Epub 2008 Dec 12.

[19] Walsh GM. An update on emerging drugs for asthma. Expert Opin Emerg Drugs. 2012 Mar;17(1):37-42.

[20] Ying Wang, Yingmei Zhang, Wenling Han, Dan Li, Linjie Tian,Caihua Yin, Dalong Ma. Two C-terminal peptides of human CKLF1 interact with chemokine receptor CCR4. Int.J.Biochem.Cell.Biol. 2008; 40: 909-919.

[21] Yi Zheng, Changyuan Guo, Yan Zhang, Hui Qi, Qianying Sun, Enquan Xu, Yingmei Zhang, Dalong Ma, Ying Wang. Alleviation of murine allergic rhinitis by C19, a C-terminal peptide of chemokine-like factor 1 (CKLF1). International Immunopharmacology, 2011, 11, 2188-2193.

[22] Linjie Tian, Wen Li, Jiaoli Wang, Yan Zhang, Yi Zheng, Hui Qi, Xiaohuan Guo, Yingmei Zhang, Dalong Ma, Huahao Shen, Ying Wang. The CKLF1-C19 peptide attenuates allergic lung inflammation by inhibiting CCR3- and CCR4- mediated chemotaxis in a mouse model of asthma. Allergy, 2011, 66: 287–297.

研究成果：                                             

CKLF1是本中心2001年在国际上首次报道的新细胞因子(Han WL, Lou YX, Tang JM, et al. Molecular cloning and characterization of chemokine-like factor 1 (CKLF1), a novel human cytokine with unique structure and potential chemotactic activity. Biochem J, 2001, 357:127-135.)，具有自主知识产权。经过9年的研究，证明CKLF1是一个新的炎症促进分子。

CKLF1 C端多肽C19是CKLF1的C端19个氨基酸多肽。利用果蝇表达系统，表达纯化分泌形式的CKLF1，经N端测序，得到两种分泌形式多肽，即CKLF1 C端多肽C19和C27。CKLF1和其C端多肽均可以作用于CCR4受体，C27趋化效应较强，C19较弱。C19、C27均可以抑制CCR4已知配体CCL17/TARC、MDC/CCL22介导的细胞趋化作用，还可以抑制Eotaxin/CCL11趋化因子介导的细胞趋化作用。研究显示，趋化因子N端截短体通常会影响其功能及受体结合能力，丧失或部分丧失趋化功能，体内外研究中表现出拮抗炎症的作用。C19和C27也有上述类似情况。与C27相比，C19缺少其N端的8个氨基酸，C19仍能诱导CCR4受体内化，但趋化作用、诱导细胞钙流反应较弱，与肝素的结合能力也减弱。

因此，C19肽弱的趋化因子受体活化作用和较强的受体去敏感能力，使它成为趋化因子受体拮抗肽。目前研究已显示C19肽不仅可拮抗CKLF1的趋化功能，还可拮抗CCR3、CCR4多种趋化因子及受体介导的细胞趋化功能。在小鼠体内过敏性鼻炎和哮喘模型上结果显示，C19能够抑制鼻部和肺部呼吸道嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润并降低气道高反应性，而C27有增强的趋势。C19多肽局部滴鼻给药具有良好的药效，与布地奈德疗效相似。有望成为新的抗炎多肽药物。目前其主要适应症是用于过敏性哮喘、过敏性鼻炎的治疗。

CKLF1-C19作为新的抗过敏多肽药物的主要依据包括：

• CKLF1-C19属于小分子多肽药物，适合低成本大规模制药：

CKLF1-C19多肽源自人体内源蛋白CKLF1，仅有19个氨基酸。其化学合成产物具有生物活性，易于大规模低成本的工业化生产，其化学合成产物较低剂量即可发挥体内抗炎生物活性，未见体内毒副作用。因此，C19肽作为趋化因子受体拮抗剂可望成为一个具有国际专利、成药性好、可产业化的新的多肽药物。

• CKLF1-C19可抑制多种趋化因子受体及配体相互作用：

重组蛋白CKLF1具有趋化单核细胞、淋巴细胞和粒细胞的广谱趋化活性。本实验室利用趋化因子受体高表达细胞系、趋化因子受体转染的HEK293细胞、人或小鼠Th2细胞、嗜酸性粒细胞等，证明CKLF1-C19的体外趋化作用较弱，但可以抑制CKLF1介导的细胞趋化作用，而且还可以抑制TARC/CCL17、MDC/CCL22、RANTES/CCL5、Eotaxin/CCL11、SDF1/CXCL12等多种趋化因子介导的细胞趋化作用。炎症病理过程是一个复杂的病理过程，涉及多种趋化因子受体及配体，而CKLF1-C19可拮抗多种趋化因子受体及配体的相互作用，发挥抗炎作用。

• CKLF1在自身免疫病、过敏性疾病中高表达并参与病理性炎症过程：

临床资料、炎症动物模型研究表明，CKLF1是一个与炎症过程密切相关的分子。在哮喘及SARS患者肺组织中内源性CKLF1表达水平明显升高，注射CKLF1真核表达质粒或CKLF1转基因小鼠的肺部炎性病变明显，与哮喘发病后期的病理改变相似。除了哮喘相关炎症外，在类风湿关节炎病人滑膜中、狼疮肾炎病人组织，以及在炎性肌病患者组织中，内源性CKLF1表达水平均明显升高。此外，炎症动物模型数据与临床资料一致，BXSB狼疮小鼠肌肉注射CKLF1真核表达质粒，加重了BXSB狼疮小鼠的肾炎反应。在SCW及佐剂诱导的大鼠类风湿关节炎模型中，内源性Cklf1表达上调。这些结果说明CKLF1与其它趋化因子受体及配体有着类似的病理炎症过程相关性，提示CKLF1-C19在临床应用时可拮抗其作用。

主要相关文献：

1. Wang Y., Zhang YM., Yang Xue., et al. Chemokine-Like Factor 1 Is a Functional Ligand for CC Chemokine Receptor 4 (CCR4). Life Science, 2006, 78(6):614-621.
2. Han WL., Rui M., Zhang YM., et al. Stimulatory effect of chemokine-like factor 1 (CKLF1) on the growth of bone marrow cells. Acta Acad Med Sin., 2001, 23(2):119-22.
3. Ke XY., Jia LP., Jing HM., et al. Effects of novel human chemokine-like factor 1 (CKLF1) on bone marrow hematopoietic stem cell/progenitor cell in vitro. Chin J Hematol., 2002, 23(6): 301-303.
4. Lu SJ., Li F., Vida L., and Honig GR. CD34+CD38- hematopoietic precursors derived from human embryonic stem cells exhibit an embryonic gene expression pattern. Blood. 2004, 103: 4134-4141
5. Xia DL., Li XT., Lou YX., et al. Overexpression of chemokine-like factor 2 promotes the proliferation and survival of C2C12 skeletal muscle cells. Biochim Biophys Acta., 2002, 1591(1-3): 163-173.
6. Cheng AX., Han WL., Ma DL., Lou SQ.. Effects of chemokine-like factor 1 (CKLF1) on proliferation and metabolism of chondrocytes.J Peking Univ [Heal th Sci], 2003, 35(4): 399-401.
7. Taylor MW., Grosse WM., Schaley JE., et al. Global Effect of PEG-IFN-a and Ribavirin on Gene Expression in PBMC In Vitro. Journal of Interferon & Cytokine Research, 2004, 24:107-118.
8. Kim CH., Lim HW., Kim JR., Rott L., Hillsamer P., and Butcher EC.. Unique gene expression program of human germinal center T helper cells. Blood, 2004, 104(7):1952-1960.
9. Tan YX., Ma DL., Han WL., et al. Chemokine-like factor 1, a novel human cytokine, contributes to the airway remodeling in asthma. The Asthma International Conference, 2001, Chicago. U. S. A.
10. Tan YX., Han WL., Chen YY., et al. Chemokine-like factor 1, a novel cytokine, contributes to airway damage, remodeling and pulmonary fibrosis. Chin Med J., 2004, 117(8): 1123-1129.
11. Xu ZW., Deng HY., Ma DL..Effect of human chemokine-like factor 1 expression in vivo on the development of systemic lupus erythematosus in BXSB mice. Chin J Rheumatol., 2001, 5(3): 162-164.
12. Rioja I., Clayton CL., Graham SJ., et al. Gene expression profiles in the rat streptococcal cell wall-induced arthritis model identified using microarray analysis. Arthritis Res Ther., 2005, 7(1): R101-117.
13. Keith JC, Albert LM, Leathurby Y, Follettie M, Wang LL, Borges-Marcucci L, Chadwick CC, Steffan RJ, Harnish DC: The utility of pathway selective estrogen receptor ligands that inhibit nuclear factor-kappa B transcriptional activity in models of rheumatoid arthritis. Arthritis Research & Therapy 7 (3): R427-R438 2005（A non-steroidal estrogen receptor ligand, WAY-169916, selectively inhibits NF-kappaB transcriptional activity and CKLF1 expression）
14. Zhong WD., Zeng GQ., Cai YB., et al. Pathological changes in seminiferous tubules in infertility mice induced by chemokine-like factor 1. Chin J Exp Surg., 2003, 20 (11): 1027-1028.
15. Santin AD., Zhan F., Bignotti E., et al. Gene expression profiles of primary HPV16- and HPV18-infected early stage cervical cancers and normal cervical epithelium: identification of novel candidate molecular markers for cervical cancer diagnosis and therapy. Virology, 2005, 331: 269-291.
16. Lou YX., Xia DL., Han WL., et al. Molecular cloning and characterization of rat chemokine-like factor 1 and 2. Gene, 2003, 307: 125-132. 
17. Rui M., Xia DL., Zhang YM., et al. Molecular cloning and characterization of four isoforms of mCKLF, mouse homologues of human chemokine-like factor. Mol Biol Rep., 2003, 30(4): 229-237. 
18. Xia DL., Lou YX., Han WL., et al. Study on the enhancing effect of rCKLF1, 2 on the proliferation of myoblast cells. Chin J Cell Mol Immunol. 2002, 18(4): 313-315.
19. Gong YJ., Hong T., Jiang J., et al. Expression of chemokine-like factor 2 mRNA in the rat myocardium after myocardial infarction. J Peking Univ [ Heal th Sci ], 2003, 35: 438-440.
20. Cheng A, Han W, Ma D, and Lou S: Effects of chemokine-like factor 1 (CKLF1) on proliferation and metabolism of chondrocytes. Journal of Peking University [Health Sciences] 2003, 35(4),399-401
21. Ren HK., Hong T., Jiang J., et al. Expression of chemokine-like factor 2 mRNA in rat myocardium with hypertrophy. J Peking Univ [ Health Sci ], 2004, 36: 399-402.
22. Yingyu Chen, Ting Zhang, Ting Li, Wenling Han, Yingmei Zhang, Dalong Ma. Preparation and characterization of monoclonal antibody against CKLF using DNA immunization with in vivo electroporation. Hybridoma,2005, 2005, 24 (6) :305-308.
23. Li T, Zhong J, Chen YY, et al. Expression of Chemokine-Like Factor 1 is Upregulated during T Lymphocyte Activation. Life Science. 2006, 79(6): 519-524.
24. Anne Angevine, Jonathan McCafferty, Govind Bhagat, Richard Friedman, Susan Vogel, BSN1, Arthur Bank, Christine Richardson, and John G. Mears. Differential Gene Expression in Nodular Sclerosis Hodgkin Lymphoma: The Role of the Reactive Infiltrate in Disease Pathogenesis. Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 2006 108: Abstract 2264.
25. Ji Y, Zhang H, Yuan H, Yang GP, Zhang K, Xie LH.Expression of chemokine like factor-1 in nephridial tissue of lupus nephritisZhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2007 Jun;32(3):490-3.
26. Chowdhury MH, Nagai A, Terashima M, et al. Chemokine-like factor expression in the idiopathic inflammatory myopathies. Acta Neurologica Scandinavica, 2008, 118(2): 106-114
27. Zhen-Zhen Wang, Gang Li, Xiao-Yu Chen, Ming Zhao, Yu-He Yuan, Xiao-Liang Wang and Nai-Hong Chen. Chemokine-like factor 1, a novel cytokine, induces nerve cell migration through the non-extracellular Ca2+-dependent tyrosine kinases pathway. Brain Research 2010, 1308: 24-34.
    • CKLF1-C19对小鼠体内炎症具有明显抑制作用：

1. 在小鼠哮喘模型中，合成的CKLF1-C19多肽可明显抑制嗜酸性粒细胞在肺部的浸润，降低气道反应性，治疗过程中未见明显毒副作用（与浙江大学呼吸病研究所合作完成）。

2. 在小鼠过敏性鼻炎模型中，合成的CKLF1-C19多肽可明显抑制嗜酸性粒细胞在鼻黏膜中的浸润，改善局部症状，与布地奈德疗效相似；并且滴鼻给药和腹腔注射同样有效，治疗过程中未见明显毒副作用：

为了评价C19在过敏性鼻炎中的治疗应用，在过敏性鼻炎小鼠模型上，对C19治疗的不同给药途径和疗效进行了探索。实验中，C19通过滴鼻和腹腔注射两种方式给药，并选用激素类药物布地奈德作为阳性对照。实验结果表明，C19滴鼻和腹腔注射治疗均能改善鼻部瘙痒、打喷嚏等过敏症状，并能明显降低血清中IgE水平；检测肺泡灌洗液中C19治疗组中IL-4的表达水平显著低于致敏组，而对IFN-γ的表达水平没有明显的影响；同时，对鼻黏膜和肺组织的HE染色结果和症状评分显示，C19可明显抑制嗜酸性粒细胞的浸润。与布地奈德相比，C19的治疗效果与其基本相似。在对嗜酸性粒细胞的抑制作用方面，C19较高剂量滴鼻给药在对鼻黏膜中嗜酸性细胞浸润的抑制作用上，可以显示出比其它治疗组（包括布地奈德在内）更好的作用。综上所述，C19在过敏性鼻炎小鼠模型中对过敏性鼻炎存在较明确的治疗作用，并且滴鼻给药有效。因此，C19多肽药物可以通过安全、方便、经济的滴鼻给药途径，有望成为一种新的、有效、安全的治疗药物。

• CKLF1-C19的作用靶点是目前国际抗炎治疗研究的热点之一：

CKLF1-C19可抑制多种趋化因子受体及配体相互作用。而异常的炎症细胞迁徙是自身免疫性疾病、过敏性疾病发病过程中的重要事件，在这一过程中，趋化因子及其受体扮演了重要的角色。研究表明多种趋化因子及其受体在炎症发病过程中起重要作用，以趋化因子及其受体为靶点来治疗炎症近年来已成为研究热点，前景看好，提示CKLF1-C19具有新药的开发前景。

目前，CKLF1-C19已作为抗过敏治疗的候选药物进行研究和开发，并得到科技部国家重大专项“重大新药创制”的支持。

CKLF1及其C端衍生肽相关专利：

本课题重点开发具有自主知识产权和发展前景的新结构新机制的生物技术药物CKLF1的C端衍生肽C19，具有原始创新性。北京大学医学部已经申请5项专利，包括CKLF1及其C端衍生肽序列专利、用途专利、单克隆抗体专利等，4项专利已经授权，其中2项获美国专利授权。目前国际没有同类产品和专利。本课题组申请的CKLF1和其C端衍生肽原始序列及所含用途的专利已申请国际专利，为下阶段人CKLF1的C端衍生肽进入国际市场做好准备。

1. 6,800,454: Nucleic acid molecule encoding chemokine-like factor 1 (CKLF1). Ma Dalong; Han Wenling, Zhang Yingmei, Song Quansheng, Di Chunhui, Huang Jiaqiang, Tang Jian, Chen Guanghui. U.S. Patent, Issued on October 5, 2004.
2. US 7465453 B2, 11/810,590, PCT/CN2005/002179: Polypeptide fragments of CKLF1. Ying Wang, Yingmei Zhang, Wenlin Han, Dalong Ma, Yanan Liu, Caining Jin, Linjie Tian, Dan Li. U.S. Patent, Issued on Dec.16, 2008.
3. ZL200410098627.1。王应，张颖妹，韩文玲，马大龙等。具有多种功能的多肽。授权公告日2009年3月11日；
4. ZL01139963.5。趋化素样因子-1在制备具有治疗器官炎性损伤作用抗体中的用途。钟南山，谭亚夏，马大龙，韩文玲，宋泉声，陈英玉。2001年11月21日申请，2005年1月26日获得国家知识产权局发明专利授权。与广州呼吸疾病研究所联合申请。
5. ZL200510059716.x.人趋化因子单克隆抗体。陈英玉，韩文玲，马大龙，李婷，张婷。申请日2005年3月31日。2008年5月7日获得国家知识产权局发明专利授权。

CKLF1的C端衍生肽代表性论文：

Ying Wang, Yingmei Zhang, Wenling Han, Dan Li, Linjie Tian, Caihua Yin, Dalong Ma. Two C-terminal peptides of human CKLF1 interact with chemokine receptor CCR4. Int.J.Biochem.Cell.Biol.2008; 40: 909-919.

Linjie Tian, Wen Li, Jiaoli Wang, Yan Zhang, Yi Zheng, Hui Qi, Xiaohuan Guo, Yingmei Zhang, Dalong Ma, Huahao Shen, Ying Wang. The CKLF1-C19 peptide attenuates allergic lung inflammation by inhibiting CCR3- and CCR4- mediated chemotaxis in a mouse model of asthma. Allergy, 2011, 66: 287–297.

Yi Zheng, Changyuan Guo, Yan Zhang, Hui Qi, Qianying Sun, Enquan Xu, Yingmei Zhang, Dalong Ma, Ying Wang. Alleviation of murine allergic rhinitis by C19, a C-terminal peptide of chemokine-like factor 1 (CKLF1). International Immunopharmacology, 2011, 11, 2188-2193.

发展规划                                               

目前完成了CKLF-C19实验室体内外药效研究，进行了急毒试验，未见毒副作用。

目标：

一、中试及临床前研究：

1. 建立原料药中试生产和纯化工艺

2．按新药注册要求建立质量标准

3. 完成处方筛选和制剂工艺研究（计划首选局部给药制剂）

4. 获得三批中试生产产品，制剂批生产能力大于1000支，具备提供CKLF1-C19多肽临床试验用药的生产能力

5. 进行产品长期稳定性实验

6. 按照生物制品一类新药的注册要求，完成多肽新药CKLF1-C19抗炎治疗的毒理学、药理学和药代动力学，进行药效学和安全性评价。首选适应症为过敏性鼻炎或哮喘。

7. 完成新药注册申报资料，提出临床试验申请，获得临床研究批文

二、完成临床1、2、3期试验，申报新药证书及生产许可证。

合作及转让意向：

有意向合作开发或技术转让的企业请联系：王应教授（yw@bjmu.edu.cn）